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詳解黃曲霉毒素親和柱的分析步驟

更新時(shí)間:2022-05-26      點(diǎn)擊次數(shù):1380
  黃曲霉毒素親和柱能夠特異性的純化與濃縮樣品中的黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2。黃曲霉毒素免疫親和柱廣泛地應(yīng)用于糧食、食品、飼料、堅(jiān)果、花生、醬油、醋、辣椒、胡椒、藥材和酒類等樣品的提取,該方法速度快、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高,對(duì)準(zhǔn)確靈敏的測(cè)定樣品中的黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2起到十分重要的作用。
 
  原理:樣品經(jīng)甲醇+水提取液提取、過濾、稀釋,然后通過鍵合有黃曲霉毒素特殊抗體的免疫親和柱。此時(shí),黃曲霉毒素被親和柱中的抗體特異性的吸附,用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去,然后用甲醇使抗體變性,從而將黃曲霉毒素從親和柱上洗脫下來。用HPLC或熒光計(jì)進(jìn)行定量檢測(cè)。
 
  黃曲霉毒素親和柱分析步驟:
  1.樣品提取及稀釋:
  大米、玉米、小麥、堅(jiān)果、調(diào)料、花生及其制品:準(zhǔn)確稱取試樣25.0g于250mL具塞錐形瓶中,加入5.0g氯化鈉及準(zhǔn)確加入125.0mL甲醇-水(7+3),以均質(zhì)器高速攪拌提取2min。槽紋濾紙過濾,準(zhǔn)確移取15.0mL濾液并加入30.0mL水稀釋,用玻璃纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用。
  植物油脂:準(zhǔn)確稱取試樣25.0g于250mL具塞錐形瓶中,加入5.0g氯化鈉及入125.0mL甲醇-水(7+3),以均質(zhì)器高速攪拌提取2min。槽紋濾紙過濾,準(zhǔn)確移取15.0mL濾液并加入30.0mL水稀釋,用玻璃纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用。
  醬油:稱取試樣50.0g于250.0mL具塞錐形瓶中,加入2.5g氯化鈉及加入甲醇-水(8+2)至100.0mL,以均質(zhì)器高速攪拌提取1min。槽紋濾紙過濾,準(zhǔn)確移取10.0mL濾液并加入40.0mL水稀釋,用玻璃纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用。
  2.樣品的凈化
  黃曲霉毒素總量免疫親和柱的柱容量(吸附黃曲霉毒素量)為300ng,當(dāng)樣品中黃曲霉毒素超過測(cè)定范圍時(shí),請(qǐng)適當(dāng)減小上柱體積,使其在檢測(cè)范圍內(nèi),計(jì)算出含量。
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